Arthrobacter globiformis T6 イソマルトデキストラナーゼの発現系の構築と性質の解析

• Published in: Journal of Applied Glycoscience 2004, Vol.51(1), pp.27-32
• Main Authors: 殿塚, 隆史, 鈴木, 沙織, 池原, ゆかり, 水野, 正浩, 金, 然桂, 西河, 淳, 坂野, 好幸
• Format: Article
• Language: Japanese
• ISSN: 1344-7882; 1880-7291
• DOI: 10.5458/jag.51.27

Arthrobacter globiformis T6イソマルトデキストラナーゼについて，大腸菌による効率的な発現系を構築した．シグナルペプチドを欠失させた発現ベクター(Fig. 1)，および25℃という培養温度条件を用い，さらに大腸菌株を検討した結果，当初の段階に比べ発現量は1000倍以上増加し，本酵素の詳細な性質の決定に十分な酵素量を得ることができた(Table 1)．一次構造上，A. globiformis T6イソマルトデキストラナーゼは糖質加水分解酵素のファミリー27に属するα-ガラクトシダーゼおよびα-N-ガラクトサミニダーゼとわずかながら相同性を有することが報告されている．そこで，本実験ではα-ガラクトシダーゼの基質であるメリビオースとイソマルトデキストラナーゼとの反応を調べた．イソマルトデキストラナーゼはメリビオースおよびp-ニトロフェニルα-D-ガラクトシドを加水分解しなかった．イソマルトースおよびマルトースに対する本酵素のKi値はそれぞれ2.3および7.8 mMであったが，メリビオースはほとんど本酵素の活性を阻害しなかった(Fig. 2)．さらに，メリビオースはデキストランを用いた糖転移反応においても良いアクセプターではなく，イソマルトースをアクセプターとして用いた場合の12分の1しか糖転移反応産物が得られなかった(Fig. 3)．本実験の結果，イソマルトデキストラナーゼは加水分解および糖転移において特異的にグルコース残基を認識するものと考えられた．