小鼠HIF-1α基因干扰质粒的构建及其体外抑制效果研究

目的构建特异的靶向小鼠HIF-1α基因的RNA干扰质粒,检测其对HIF-1α表达的特异性和有效性。方法用双酶切方法构建了三组靶向小鼠HIF-1α基因的特异性RNA干扰质粒,pBS/U6/HIF-1α-siRNAI～III。采用RT-PCR、免疫细胞化学染色和western blotting分别检测了转染三组干扰质粒对293T细胞内HIF-1α表达的影响。检测了pBS/U6/HIF1αi-II质粒对SH-SY5Y细胞中HIF-1α表达的量效干扰效应。结果三组RNA干扰质粒均可显著降低293T细胞中HIF-1α的表达,尤以pBS/U6/HIF1αi-II质粒的干扰效果最佳。验证了pBS/U6/HI...

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Published in:Neuroscience bulletin 2009 (3), p.122-130
Main Author: 丁震宇 李泽桂 星懿展 纪华 李红丽 常智杰
Format: Article
Language:English
Subjects:
pBS/U6/HIF-1α-siRNA
RNA干扰
低氧诱导因子-1α
小鼠
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Description
Summary:目的构建特异的靶向小鼠HIF-1α基因的RNA干扰质粒,检测其对HIF-1α表达的特异性和有效性。方法用双酶切方法构建了三组靶向小鼠HIF-1α基因的特异性RNA干扰质粒,pBS/U6/HIF-1α-siRNAI～III。采用RT-PCR、免疫细胞化学染色和western blotting分别检测了转染三组干扰质粒对293T细胞内HIF-1α表达的影响。检测了pBS/U6/HIF1αi-II质粒对SH-SY5Y细胞中HIF-1α表达的量效干扰效应。结果三组RNA干扰质粒均可显著降低293T细胞中HIF-1α的表达,尤以pBS/U6/HIF1αi-II质粒的干扰效果最佳。验证了pBS/U6/HIF1αi-II质粒对SH-SY5Y细胞系中HIF-1α的表达存在剂量效应关系。结论本实验构建的pBS/U6/HIF1αi-Ⅱ干扰质粒能有效特异地抑制HIF-1α的表达,其在神经管发育和神经管缺陷中的作用将被进一步探讨。pBS/U6/HIF1αi-II的构建还为探讨HIF-1途径在胚胎发育、肿瘤发生和缺血性疾病中的作用提供了有用的研究工具。
ISSN:1673-7067