Frühe, implantationsfördernde Genexpressionen in der murinen Blastozyste

• Main Authors: Baston-Büst, DM, Hess, AP, Schanz, A, Ingmann, S, Hirchenhain, J, Krüssel, JS
• Format: Conference Proceeding
• Language: ger
• ISSN: 0016-5751; 1438-8804
• DOI: 10.1055/s-2008-1075765

Frühe, implantationsfördernde Genexpressionen in der murinen Blastozyste Einleitung: Der Wachstumsfaktor VEGF (vascular endothelial growth factor), der u.a. im Ovar und Endometrium produziert wird, ist an zwei Grundvoraussetzungen einer erfolgreichen Schwangerschaft beteiligt: der Angiogenese und der Vaskulogenese. Relaxin (RLX) wird, ebenso wie dessen Rezeptor RXFP1 (relaxin familiy peptide receptor 1; LGR7), u.a. im Endometrium exprimiert und übt im Rahmen von Dezidualisierung und Implantation verschiedene Einflüsse aus (z.B. Aktivierung von VEGF, IGFBP1 [insulin-like growth factor binding protein] und Prolaktin). Es ist bekannt, dass die Aktivierungen von VEGF und Relaxin während der Dezidualisierung endometrialer Stromazellen einen wichtigen Beitrag zur regelrechten Implantation eines Embryos leisten. Es sollte einerseits untersucht werden, ob eine zeitabhängige Expression der VEGF-Familie in murinen Präimplantationsembryonen besteht und die in-vitro-Kultur einen möglichen Einfluss auf dieses System ausübt und andererseits, ob bereits im Rahmen der frühen Embryonalentwicklung das Relaxin-System exprimiert wird. Material: -hCG-injectionem), anschließende Reverse Transkription (RT) einzelner Blastozysten mit PCRs für VEGF, VEGFR1 und R2 und sFlt (Kontrolle β-Aktin). 2) Aufnahme der Zygoten in die in-vitro Kultur 24 Stunden post-β-HCG in G1.3 Medium; nach 48 Stunden Umsetzung in G2.3 Medium. Als Kontrollen dienten 101 Stunden post hCG aus den Uteri entnommene in-vivo Blastozysten. RT einzelner Blastozysten mit anschließender PCR für VEGF, VEGFR1 und R2 (Kontrolle β-Aktin). 3) RT/nested-PCR für RLX und RXFP1 einzelner Blastozysten 72h post hCG. Immunfluoreszenz muriner Blastozysten nach Retransfer in utero. Ergebnisse: Wir konnten einen Anstieg der VEGF-mRNA Expression mit zunehmender Entwicklungsdauer der Präimplantationsembryonen feststellen (˜ 40% im 8-Zell-Stadium, ˜90% in späten Blastozysten). Nahezu 70% der 8-Zell-Stadien und frühen Blastozysten exprimierten die VEGFR2-mRNA im Gegensatz zu nur 20% der Morulae bzw. späten Blastozysten. Hinsichtlich der VEGFR1-mRNA Expression konnten wir mit Ausnahme der Morulae einen Anstieg von ˜10% in den 8-Zell-Stadien auf ˜50% in den späten Blastozysten verzeichnen. Alle untersuchten Präimplantationsembryonen waren negativ für die Expression des VEGF-Inhibitors sFlt. 139 einzelne Embryonen (77 in-vivo und 62 in-vitro Blastozysten) wurden bezüglich ihrer β-Aktin Expression untersucht (Ausschluss von 10 aufgrund feh