Purificación y caracterización de lipopolisacaridos de Eikenella corrodens 23834 y Porphyromonas gingivalis W83

• Published in: Revista Colombiana de biotecnologia 2014-07, Vol.16 (1), p.34-44
• Main Authors: Gualtero Escobar, Diego Fernando, Porras Gaviria, Jeimy Paola, Bernau Gutiérrez, Sebastián, Buitrago Ramírez, Diana Marcela, Castillo Perdomo, Diana Marcela, Lafaurie Villamil, Gloria Inés
• Format: Article
• Language: Spanish
• Subjects: BIOTECHNOLOGY & APPLIED MICROBIOLOGY; ceto; Chromatography; cromatografía; deoxyoctonate (KDO); desoxioctulosónico (KDO); endotoxin; endotoxinas; keto; Limulus test (LAL); periodontitis; test LAL; ácido 2; ácido 2-ceto-3-desoxioctulosónico (KDO)
• ISSN: 0123-3475; 1909-8758; 1909-8758
• DOI: 10.15446/rev.colomb.biote.v16n1.44224

La purificación de lipopolisacáridos (LPS) o endotoxinas y su caracterización es un aspecto esencial para estudios que buscan aclarar el papel de estas biomoléculas de bacterias Gram negativas presentes en la cavidad oral y su relación con enfermedades locales periodontales y sistémicas. Este estudio implementa una metodología para la extracción, purificación y caracterización de LPS a partir de bacteria completa de Eikenella corrodens 23834 y Porphyromonas gingivalis W83, utilizando técnicas previamente descritas. La extracción cruda de LPS se realizó con fenol-agua caliente; la purificación se realizó con tratamiento enzimático con nucleasas y proteasa, seguido de cromatografía de exclusión por tamaño (Sephacryl S-200 HR) con deoxicolato de sodio como fase móvil. La caracterización de los extractos purificados se realizó por barrido espectrofotométrico, pruebas bioquímicas de electroforesis SDS-PAGE, ensayo Purpald y la prueba cromogénica de LAL. Como control para la identificación y caracterización de los extractos purificados se utilizaron LPS comerciales de Escherichia coli, Salmonella typhimurium, Rodobacter sphaeroides y Porphyromonas gingivalis. La metodología implementada permitió la obtención de LPS de elevada pureza con la identificación de KDO o heptosas, un quimiotipo de LPS-S (liso) para E. corrodens y LPS-SR (semi-rugoso) para P. gingivalis W83. Ambos LPS purificados mostraron capacidad endotóxica a bajas concentraciones. La metodología implementada en este estudio para la purificación y caracterización de LPS a partir de bacteria completa fue eficiente al compararla con los LPS comerciales.