Ensayo de neutralización in vitro de aplicación en la evaluación de inmunógenos contra la hepatitis A, obtenidos mediante la tecnología de expresión en fagos filamentosos

• Published in: Vaccimonitor 2010-04, Vol.19 (1), p.16-19
• Main Authors: Aguilar, Alicia, Martínez, Raiza, Camacho, Frank, Amin¹, Nevis, Alfonso, José Luis, Stott, David, Pérez, Ela María
• Format: Article
• Language: eng ; por
• Subjects: BIOLOGY; fagos; inmunogenicidad; mimotopos; neutralización; VHA
• ISSN: 1025-0298; 1025-028X; 1025-0298

La inmunidad contra el virus de la hepatitis A (VHA) se debe en primera instancia a la inducción de anticuerpos neutralizantes. Disponer de ensayos de neutralización es indispensable para evaluar nuevos candidatos vacunales contra este patógeno. En el presente trabajo se desarrolló un ensayo de neutralización in vitro que permitió evaluar la inmunogenicidad de mimotopos del VHA obtenidos mediante la tecnología de expresión en fagos al ser inmunizados ratones Balb/c. Diferentes diluciones de anticuerpos se incubaron con 10³ o 10² Dosis Infecciosas en Cultivo de Tejidos 50% (DICT50) del clon citopático HM175/18f de VHA, y se inocularon en placas con células FRhK4. Después de 7 días de incubación el título neutralizante se determinó como el recíproco de la dilución del suero capaz de reducir la multiplicación viral al 50%. Tanto 10³ como 10² DICT50 fueron neutralizadas por el anticuerpo monoclonal 7E7 y los sueros humanos (A12 y A31) positivos a anticuerpos anti-VHA. Los controles negativos del ensayo no neutralizaron al virus. Los títulos neutralizantes de los sueros de ratones inmunizados con fagos portadores de mimotopos de VHA oscilaron entre 4 y 16, mientras que los sueros preinmunes y los de ratones inmunizados con fago salvaje M13 no neutralizaron la infectividad viral. Este ensayo de neutralización resultó adecuado para la evaluación de los inmunógenos propuestos.