Detection by multiplex PCR of Staphylococcus aureus , S. intermedius and S. hyicus in artificially contaminated milk

• Published in: Ciência rural 2016-08, Vol.46 (8), p.1418-1423
• Main Authors: Gandra, Eliezer Avila, Fernandez, Maria Aparecida, Silva, Jorge Adolfo, Silva, Wladimir Padilha da
• Format: Article
• Language: English
• Subjects: AGRONOMY; Amplification; Coagulase; Contamination; Deoxyribonucleic acid; DNA; E coli; Efficiency; Enzymes; Escherichia coli; Food contamination & poisoning; Genes; Genetic testing; Listeria; Listeria monocytogenes; Milk; Multiplex PCR; Multiplexing; nuc gene; Pathogens; Primers; Species; Staphylococcus; Staphylococcus aureus; Staphylococcus epidermidis; Staphylococcus hyicus; Staphylococcus intermedius; Target detection
• ISSN: 1678-4596; 0103-8478; 1678-4596
• DOI: 10.1590/0103-8478cr20151391

This research aimed to detect coagulase-positive Staphylococcus (CPS) directly in samples of artificially contaminated milk, using multiplex PCR (mPCR). Standard and isolated bacterial strains of S. aureus, S. epidermidis, S. hyicus, S. intermedius, Listeria monocytogenes and Escherichia coli species were used, evaluating the specificity and detection limit of mPCR, for artificially contaminated UHT milk. Primers specific for the nuc gene (NUC1-NUC2 were used for S. aureus, NUC3-NUC4 for S. hyicus and NUC5-NUC6 for S. intermedius). It was possible to detect the three target species by mPCR, directly from bovine whole milk, with adequate specificity and acceptable detention limit for identification of coagulase-positive Staphylococcus (CPS) in foods. The specificity was determined by the amplification of species-specific fragments, and the detection limit was assessed by the detection thresholds obtained for the three species (103 CFU mL-1). From these results, the mPCR described, with the proposed set of primers, has the potential for use in precise identification and differentiation between CPSs in milk samples. RESUMO: Esta pesquisa teve como objetivo detectar diretamente em amostras de leite contaminado artificialmente Staphylococcus coagulase positiva (ECP) por multiplex PCR (mPCR). Cepas padrão e isolados de S. aureus, S. epidermidis, S. hyicus, S. intermedius, Listeria monocytogenes e Escherichia coli foram utilizados no estudo. Foram utilizados primers específicos para o gene nuc (NUC1-NUC2 para o S. aureus, NUC3-NUC4 para o S. hyicus e NUC5-NUC6 para o S. intermedius ). Foi possível detectar as três espécies-alvo por mPCR, formar diretamente nas amostras de leite integral bovino, com especificidade adequada e limite de detecção aceitável para identificação de espécies de Staphylococcus coagulase positiva (ECP) em alimentos. A especificidade foi determinada por meio da amplificação de fragmentos específicos das espécies e o limite de detecção foi avaliado pelos limiares de detecção obtidos para as três espécies (103 UFC mL-1 para as espécies presentes nas amostras de leite contaminadas artificialmente).