Production, purification and characterization of uricase produced by pseudomonas aeruginosa

في هذا البحث تم إنتاج إنزيم اليوريكيز من بكتريا Pseudomonas aeruginosa كميا باعتماد الطريقة اللونية كما تم تنقيته باستخدام الترسيب بملح كبريتات الامونيوم عند نسبة إشباع 80 % ثم كروماتوغرافيا التبادل الأيوني باستخدام المبادل DEAE-Cellulose و الثانية باستخدام كروماتوغرافيا الترشيح الهلامي باستخدام هلا...

Full description

Saved in:
Bibliographic Details
Published in:Iraqi journal of science 2015, Vol.56 (3B), p.2253-2263
Main Authors: Abd Allah, Suhad Kazim, Fulayyih, Mayy Talib
Format: Article
Language:ara ; eng
Subjects:
Biotechnology
Colorimetry
Enzymes
Identification
Peroxisomes
Pseudomonas
Pseudomonas aeruginosa
Purification
Urate oxidase
Uricase
الأنزيمات
التكنولوجيا الحيوية
Online Access:Get full text
Tags: Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
Description
Summary:في هذا البحث تم إنتاج إنزيم اليوريكيز من بكتريا Pseudomonas aeruginosa كميا باعتماد الطريقة اللونية كما تم تنقيته باستخدام الترسيب بملح كبريتات الامونيوم عند نسبة إشباع 80 % ثم كروماتوغرافيا التبادل الأيوني باستخدام المبادل DEAE-Cellulose و الثانية باستخدام كروماتوغرافيا الترشيح الهلامي باستخدام هلام Sepharose 6B حيث تم الحصول على نسبة إرجاع بلغت 16.4 % من الانزيم و فعالية نوعية 2337.5 وحدة / ملغم و بعدد مرات تنقية بلغت 22.21. أظهر الانزيم فعالية مثلى عند درجة حرارة 45 درجة مئوية ثباتية عند 40 درجة مئوية و فعالية مثلى عند الأس الهيدروجيني 9 و الثباتية عند اس هيدروجيني تراوح بين (9-7.5) و قدر الوزن الجزيئي للانزيم بتقنية الترحيل الكهربائي باستخدام الاكريل امايد المتعدد SDS-PAGE حيث بلغ الوزن الجزيئي للانزيم تقريب 35 كيلودالتون. In this study, detection of uricase production from Pseudomonas aeruginosa isolates was done by applying colorimetric method, Uricase was purified from the most potent isolate by precipitation using ammonium sulphate (80% saturation) then purification was achieved using DEAE –Cellulose ion exchange and Sepharose 6B gel filtration chromatography column, 16.4% of total enzyme was recovered with specific activity 2337.5U/mg and 22.21folds of purification. Characterization of uricase involved detection of optimal conditions for uricase activity, the maximal activity was obtained at temperature 45ºC,while uricase appeared to be stable at 40ºC. Uricase showed optimal activity at pH 9 while pH stability was in the range of 7.5-9. Molecular weight of uricase obtained in this study determined by sodium dedosyl sulfate electrophoresis (SDS-PAGE) technique was approximately 35kDa.
ISSN:0067-2904
2312-1637