Proteomička analiza patogene plijesni Monilinia laxa

• Published in: Food Technology and Biotechnology 2012-09, Vol.50 (3), p.326
• Main Authors: Bregar, Olja, Mandelc, Stanislav, Celar, Franci, Javornik, Branka
• Format: Article
• Language: hrv ; eng
• Subjects: dvodimenzionalna elektroforeza; fungi; plijesni; proteomics; proteomika; two-dimensional electrophoresis
• ISSN: 1330-9862; 1334-2606

Smeđa trulež plodova, koju uzrokuje plijesan Monilinia laxa (Aderh. & Ruhl.) Honey, važan je patogen koštičavog i jabučastog voća što raste u Europi. U radu je provedena proteomička analiza te plijesni, izolirane iz plodova jabuka i marelica, da bi se dokazala njezina specifičnost za infekciju domaćina, te odredila ekspresija proteina odgovornih za njezinu specifičnost i patogenost. Također su određeni proteini koji se mogu upotrijebiti kao dijagnostički markeri. Proteini izolirani iz micelija plijesni, molekularne mase od 14 do 116 kDa, odijeljeni su 2-D elektroforezom (2-DE) i određeni bojanjem Coomassie bojom u nelinearnom pH području od 3 do 11. Za analizu dobivenoga grafičkog prikaza upotrijebljena je 2-DE referentna mapa plijesni M. laxa, te određeno 800 točaka što prikazuju proteine. Prosječni tehnički koeficijent varijacije od 13 % pokazuje da ekstrakcija proteina i 2-DE PAGE elektoroforeza imaju odličnu ponovljivost, a prosječni biološki koeficijent varijacije od 23 % omogućio je proteomičku analizu izolata. Multivarijantnom statističkom analizom glavnih komponenata (PCA) razdvojeni su izolati iz dvaju domaćina, što potvrđuje da postoji specijalizirani oblik M. laxa f. sp. mali koji uzrokuje smeđu trulež jabuke. Pomoću LC-MS/MS metode ispitano je 50 eksprimiranih proteina, od kojih je 41 pokazao podudarnost. Identificirani proteini micelija funkcionalno su razdvojeni u 6 skupina: proteini što sudjeluju u metabolizmu aminokiselina i proteina, proizvodnji energije, mehanizmu otpornosti na stres, metabolizmu masnih kiselina, te ostali proteini. Neki proteini izolirani iz plijesni s plodova jabuka djeluju kao virulentni faktori na ostale plijesni. Izolati plijesni specifični za jabuku sadržavali su približno 11 puta više enzima acetolaktat sintaze od onih izoliranih s marelica, što znači da je M. laxa specifična za domaćina. Deset proteina identificiranih samo u izolatima s jabuka mogu se upotrijebiti za razvoj dijagnostičkih markera za specifičnu M. laxa.