Diferenciação de micobactérias por PCR multiplex

O trabalho visou à otimização de um método baseado na reação em cadeia da polimerase multiplex - para diferenciação de micobactérias de interesse para a saúde pública. A PCR Multiplex baseou-se na amplificação simultânea do genehsp65, presente em todo gênero Mycobacterium, do gene dnaJ, presente ape...

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Published in:Revista da Sociedade Brasileira de Medicina Tropical 2009-12, Vol.42 (6), p.716-722
Main Authors: Poroca, Diogo da Rocha, Lima, Andrea Santos, Lima, Juliana Falcão de Araújo, Cruz, Heidi Lacerda Alves da, Montenegro, Rosana de Albuquerque, Melo, Fábio Lopes de, Schindler, Haiana Charifker, Montenegro, Lílian Maria Lapa
Format: Article
Language:Portuguese
Subjects:
TROPICAL MEDICINE
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Description
Summary:O trabalho visou à otimização de um método baseado na reação em cadeia da polimerase multiplex - para diferenciação de micobactérias de interesse para a saúde pública. A PCR Multiplex baseou-se na amplificação simultânea do genehsp65, presente em todo gênero Mycobacterium, do gene dnaJ, presente apenas em Mycobacterium tuberculosis e Mycobacterium avium e da sequência de inserção IS6110 presente no complexo Mycobacterium tuberculosis, gerando amplicons de 165pb, 365pb e 541pb, respectivamente. O limite de detecção foi de 1fg para o alvo hsp65, 100pg para o dnaJ e 0,1fg para o IS6110. A PCR multiplex detectou até 100pg de DNA de Mycobacterium tuberculosis. O sistema demonstrou ser específico e sensível na detecção de Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, Mycobacterium avium e Mycobacterium smegmatis. Os resultados obtidos utilizando cepas de referência demonstraram que a PCR multiplex pode ser uma ferramenta rápida, sensível e específica na diferenciação de micobactérias.
ISSN:1678-9849
DOI:10.1590/S0037-86822009000600020