Effectiveness of Cryptosporidium spp. oocysts detection and enumeration methods in water and milk samples

• Published in: Arquivo brasileiro de medicina veterinária e zootecnia 2006-06, Vol.58 (3), p.432-439
• Main Authors: Machado, E.C.L.(UFPE Centro de Ciências da Saúde Departamento de Nutrição), Stamford, T.L.M.(UFPE Centro de Ciências da Saúde Departamento de Nutrição), Alves, L.C.(UFRPE Departamento de Medicina Veterinária), Melo, R.G.(UFPE Centro de Ciências da Saúde Departamento de Nutrição), Shinohara, N.K.S.(UFRPE Departamento de Tecnologia Rural)
• Format: Article
• Language: English
• Subjects: concentration methods; Cryptosporidium spp; leite; milk; métodos de concentração; oocisto; oocyst; VETERINARY SCIENCES; water; água
• ISSN: 0102-0935; 1678-4162; 1678-4162; 0102-0935
• DOI: 10.1590/S0102-09352006000300023

Cryptosporidium spp. oocyst recovery in water and milk samples was evaluated. Samples were inoculated with a suspension of 1.2×10(7) Cryptosporidium spp. oocysts and submitted to centrifugal flotation, using different solutions (sucrose, NaCl, MgSO4, ZnSO4, AlSO4, NH4SO4 40% and NH4SO4 80%). Centrifugation of the samples was carried out in two stages for concentration using two methods that differed in the order in which the saturated solutions were used, namely only in the first stage of method I and only in the second stage of method II. Oocyst identification was performed using the Kinyoun and Koster histochemical staining techniques. Samples analyzed by method I showed different degree of oocyst recovery, namely 10.9% with NaCl and 42.5% with MgSO4 in water and milk samples, while those samples analyzed by method II showed 10.6% with NaCl and 5.3% with sucrose in water and milk, respectively. Histochemical staining methods have no influence on the degree of oocysts recovery. The efficiency of Cryptosporidium spp. oocysts recovery methods depends on the nature and composition of the sample and on the methodology used for oocyst concentration. Avaliou-se a recuperação de oocistos de Cryptosporidium spp. em amostras de água e leite. As amostras foram contaminadas experimentalmente com uma suspensão de 1,2×10(7) oocistos de Cryptosporidium spp. e concentradas por centrífugo-flutuação para comparação entre diferentes substâncias (sacarose, NaCl, MgSO4, ZnSO4, AlSO4, NH4SO4 40% e NH4SO4 80%). A centrifugação das amostras foi realizada em duas etapas para concentração utilizando-se dois métodos, diferentes pela ordem do uso das soluções saturadas no procedimento, na primeira etapa de concentração do método I, e na segunda etapa, do método II. A identificação do oocisto foi realizada mediante as técnicas de coloração histoquímica Kinyoun e Koster modificado. O grau de recuperação de oocistos foi 10,9% com NaCl e 42,5% com MgSO4 nas amostras de água e leite, respectivamente (método I), e de 10,6% com NaCl e 5,3% com sacarose nas amostras de água e leite, respectivamente (método II). Os métodos de coloração histoquímica não influenciaram nos resultados. A eficácia dos métodos de recuperação de oocistos de Cryptosporidium spp. depende da natureza e composição da amostra e da metodologia usada para a concentração dos oocistos na amostra.