当归拈痛汤调控Fas/caspase-8通路促进类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡

• Published in: 南方医科大学学报 2020, Vol.40 (8), p.1119-1126
• Main Authors: 赵帆, 李佳钰, 陆麒瑾, 陈恩生, 袁立霞
• Format: Article
• Language: Chinese
• ISSN: 1673-4254
• DOI: 10.12122/j.issn.1673-4254.2020.08.08

目的 探究当归拈痛汤(DGNTD)对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(FLS)凋亡及TNF受体超族成员6(Fas)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-8(caspase-8)通路的影响.方法 收集临床RA患者的滑膜组织,无菌条件下采用酶解法分离并培养出FLS细胞.采用免疫荧光染色法对细胞进行鉴定.FLS细胞分为空白组(NC组)、DGNTD低剂量组、DGNTD中剂量组、DGNTD高剂量组、Fas抑制剂联合DGNTD组(KR-33493+DGNTD组).NC组:10％空白血清干预FLS细胞;DGNTD低剂量组:10％ DGNTD低剂量含药血清干预FLS细胞;DGNTD中剂量组:10％ DGNTD中剂量含药血清干预FLS细胞;DGNTD高剂量组:10％DGNTD高剂量含药血清干预FLS细胞;KR-33493+DGNTD组:20μmol/mL KR-33493+10％DGNTD高剂量含药血清干预FLS细胞.通过MTT法检测不同剂量DGNTD对FLS细胞增殖的影响;Hoechst 33342法和Annexin V-FITC/PI流式细胞术分别检测FLS细胞凋亡特性和凋亡率;qPCR和Western blot分别检测FLS细胞Fas、Fas相关蛋白(FADD)、caspase-8、caspase-3的mRNA和蛋白表达量.结果 免疫荧光实验证明本实验提取出的细胞为FLS细胞;MTT结果显示DGNTD含药血清随着剂量和干预时间的增加可显著抑制FLS的增殖(P＜0.05);Hoechst33342和流式细胞术结果显示不同剂量的DGNTD含药血清可以显著促进FLS细胞凋亡(P＜0.05);qPCR和Western blot均显示不同剂量的DGNTD含药血清可以显著提高Fas、FADD、caspase-8、caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平(P＜0.05);进一步发现,Fas蛋白抑制剂(KR-33493)可以逆转DGNTD对FLS细胞的上述作用(P＜0.05).结论 当归拈痛汤可能通过激活Fas/caspase-8通路来诱导FLS细胞凋亡.