超声波破碎-高效液相色谱法定量检测核酸

采用超声波破碎结合高效液相色谱技术,建立了定量检测质粒DNA的方法,测量结果可以溯源至核苷酸标准物质。采用超声波破碎（功率300 W,频率24 kHz）技术将质粒DNA破碎成200～500 bp的小片段DNA,再用蛇毒磷酸二酯酶将其水解为4种核苷酸（dCMP：3.2 min;dTMP：4.7 min;dGMP：5.3 min,dAMP：6.8 min）,将产物通过HPLC分离后,采用外标法进行定量分析。应用此方法对待测质粒pNK603进行定量分析,测定的4种核苷酸的摩尔百分比（A∶T=0.95,C∶G=0.98）与理论值接近。本方法的测定结果（47.24μg/g）与实时荧光定量聚合酶链式反应（...

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Published in:分析化学 2011, Vol.39 (9), p.1442-1446
Main Author: 董莲华 盛灵慧 王晶 黎朋
Format: Article
Language:Chinese
Subjects:
聚合酶链式反应
荧光
质粒
超声波破碎
高效液相色谱
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Description
Summary:采用超声波破碎结合高效液相色谱技术,建立了定量检测质粒DNA的方法,测量结果可以溯源至核苷酸标准物质。采用超声波破碎（功率300 W,频率24 kHz）技术将质粒DNA破碎成200～500 bp的小片段DNA,再用蛇毒磷酸二酯酶将其水解为4种核苷酸（dCMP：3.2 min;dTMP：4.7 min;dGMP：5.3 min,dAMP：6.8 min）,将产物通过HPLC分离后,采用外标法进行定量分析。应用此方法对待测质粒pNK603进行定量分析,测定的4种核苷酸的摩尔百分比（A∶T=0.95,C∶G=0.98）与理论值接近。本方法的测定结果（47.24μg/g）与实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR,45.98μg/g）和PicoGreen荧光染料法（46.02μg/g）的测定结果没有显著差异,表明建立的超声波-HPLC方法可以应用于质粒DNA的定量分析。
ISSN:0253-3820
DOI:10.3724/SP.J.1096.2011.01442