体外沉默异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶对人舌鳞状细胞癌细胞增殖和凋亡的影响

• Published in: 华西口腔医学杂志 2021-02, Vol.39 (1), p.64-73
• Main Authors: 王少如, 孙伟, 周男, 赵开, 李文健, 迟增鹏, 王莹, 王奇民, 童磊, 何宗轩, 韩红钰, 陈正岗
• Format: Article
• Language: Chinese
• ISSN: 1000-1182
• DOI: 10.7518/hxkq.2021.01.010

R739.8; 目的 通过小干扰RNA(siRNA)干扰技术体外沉默异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(Icmt)基因,探讨体外沉默Icmt对舌鳞状细胞癌(TSCC)细胞增殖和凋亡能力的影响.方法 针对人Icmt基因序列设计并构建3条siRNA,经脂质体瞬时转染技术转染抑制TSCC细胞系CAL-27和SCC-4细胞Icmt表达,同时设置空白对照组(只加入转染试剂,不加入siRNA)和阴性对照组(转染NC-siRNA).应用荧光组(荧光基团Cy3标记siRNA)检测siRNA转染效率,实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测沉默Icmt后各组细胞的Icmt、RhoA mRNA表达,选取沉默效率最高组作为实验组进行后续实验.采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测转染后各组细胞Icmt、RhoA的蛋白表达及RhoA膜蛋白的表达、细胞周期蛋白1(Cyclin D1)、p21蛋白表达及细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)蛋白的表达;细胞增殖活性检测试剂盒和流式细胞术检测细胞的增殖能力、细胞周期变化;Annexin V-APC/碘化丙啶(PI)荧光双染法检测各组细胞的凋亡能力.采用GraphPad Prism 8.2.1软件对实验数据进行统计学分析.结果 与阴性对照组和空白对照组相比,实验组细胞Icmt mRNA和蛋白表达下降(P0.05),但RhoA膜蛋白表达显著降低(P0.05),但ERK的磷酸化水平明显下降(P