人肺腺癌多药耐药细胞系A549／cDDP的建立及相关基因表达检测

• Published in: Zhongguo fei ai za zhi 2009, Vol.12 (3), p.187-191
• Main Author: 潘永成 赵伟刚 王建军 刘全 杨光海 李劲松
• Format: Article
• Language: Chinese
• Subjects: 基因表达; 多药耐药; 肺肿瘤
• ISSN: 1009-3419
• DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2009.03.002

背景与目的现有研究表明，肺癌细胞多药耐药造成的化疗失败是影响患者生存率的主要原因。本研究旨在建立人肺癌多药耐药细胞系，研究其耐药特性和机制。方法应用人肺腺癌细胞株A549，采用顺铂（cDDP）大剂量间歇诱导法，建立多药耐药细胞系A549／cDDP。相差显微镜观察细胞形态和结构差异，绘制两种细胞的体外生长曲线。用MTT法检测该耐药细胞株对多种化疗药物的多药耐药性，采用流式细胞术检测该耐药细胞表面多耐药基因（MDR）的表达产物P糖蛋白（P—gp）、多药耐药相关蛋白（MRP）及谷胱甘肽硫转移系统（GSH／GST）的表达情况，应用RT—PCR检测MDR、MRP基因表达水平。结果A549／cDDP对多种抗癌药物耐药，各种抗癌药物IC50显著提高：（70．5±4．9）％的A549／DDP细胞表面P—gp表达阳性，而对照细胞A549表达仅为（42．4±5．6）％；（29．4±2．9）％的A549／DDP细胞表面MRP表达阳性，而对照细胞A549表达仅为（21．4±3．5）％，二者有差异（t=11．94；t=5．56，P均〈0．01）；A549／cDDP和A549细胞的GSH／GST表达无明显变化（P〉0．05）。RT—PCR检测发现A549／cDDP中的MDR mRNA及MRP mRNA高表达。结论建立的A549／cDDP具有明确的多药耐药性，其多药耐药基因MDR mRNA及MRP mRNA表达升高。