miR-133b靶向PKM2基因对肺癌A549干细胞增殖及药物敏感性的影响

• Published in: 中国肺癌杂志 2017, Vol.20 (6), p.376-381
• Main Author: 米永华 何苗 刘北忠
• Format: Article
• Language: Chinese
• Subjects: A549; DDP; MiR-133b; PKM2
• ISSN: 1009-3419; 1999-6187
• DOI: 10.3779/j.issn.1009-3419.2017.06.02

背景与目的已有研究表明miR-133b可抑制肺癌细胞生长,miR-133b表达水平在肺癌组织及患者血清中显著降低,miR-133b通过靶向丙酮酸激酶M2型（pyruvate kinase isozyme type M2,PKM2）基因提高鳞癌细胞的放疗敏感性,但其机制尚未明了。本研究通过提取非小细胞肺癌细胞株A549的CD133^＋/CD34^＋干细胞,研究miR-133b对其增殖及顺铂类药物（cisplatin,DDP）敏感性的影响,探讨miR-133b与PKM2基因的关系,以及它们在肺癌干细胞中的作用。方法使用miRBase和miRNAMap数据库进行miR-133b与PKM2基因的序列比对。应用免疫磁珠分选法从A549细胞中分选出CD133^＋/CD34^＋肺癌干细胞,流式细胞仪检测纯度。转染miR-133b进入CD133^＋/CD34^＋细胞,qRT-PCR检测验证miR-133b表达情况,CCK8法检测细胞增殖情况;15μg/mL DDP处理转染miR-133b细胞,检测0 h、12 h、24 h、72 h的细胞凋亡情况;采用Western blot检测PKM2蛋白水平的表达。结果PKM2基因可能为miR-133b的靶基因;流式结果显示CD133^＋/CD34^＋细胞的纯度为（92.15＋4.27）%。qRT-PCR结果显示,与对照组相比,过表达miR-133b后,miR-133b明显上调,miR-133b抑制表达后,miR-133b明显下调（P〈0.05）。细胞增殖实验及Western blot结果显示,与对照组相比,miR-133b mimics组细胞的增殖能力显著降低（P〈0.05）,PKM2蛋白水平明显降低（P〈0.05）;而抑制miR-133b表达则明显增加细胞的增殖能力及PKM2蛋白水平（P〈0.05）。DDP处理12 h后miR-133b mimics组细胞的凋亡持续明显高于对照组（P〈0.05）。miR-133b mimics＋DDP组PKM2蛋白的表达明显低于对照组及miR-133b inhibitor组（P〈0.05）。结论过表达miR-133b能够通过下调PKM2而抑制肺癌干细胞的生长和增殖,并且可以增强肺癌干细胞对DDP的敏感性。