REVITALIZAREA ȘI TESTAREA CLONELOR TULPINII CLOSTRIDIUM TETANI DIN COLECȚIA INCDMM CANTACUZINO

• Published in: Romanian archives of microbiology and immunology 2022-11, Vol.81, p.53-56
• Main Authors: Nicolae, Levandovschi, Crina, Stăvaru, Cristian, Uluitu, Marius, Necsulescu, Ana, Şerbănescu, Mihaela, Oprea, Ioana, Popa Laura, Adrian, Onu
• Format: Article
• Language: eng ; rum
• Subjects: Archives & records; Casein; Cloning; Clostridium tetani; Culture media; Flocculation; Genomes; Mass spectroscopy; Physical characteristics; Public health; rRNA 16S; Spectrum analysis; Sporogenesis; Tetanus; Tetanus toxin; Toxins; Vaccines
• ISSN: 1222-3891; 2601-9418

Obiective. Studiul constă în evaluarea si testarea a zece clone din colecţia INCDMM Cantacuzino, de Clostridium tetani „10099" („TD21"). Scopul general este mărirea capacităţii de răspuns a Institutului la pericolele ce pot afecta starea de sănătate a populaţiei. Materiale şi metode. Au fost analizate zece clone dintr-un număr de peste 1.600, ale tulpinii Clostridium tetani „10099" („TD21"). Tulpina, folosită pentru producerea vaccinului tetanic de către Institutul Cantacuzino, a fost primită de la Institutul Lister din Londra în anul 1921. Au fost preparate variante de mediu sintetic, atât uzuale, cu carne (tioglicolat, RCM), cât şi complexe, fără carne (mediu cu cazeină / soia), care corespund normelor actuale de prevenţie a transmiterii bolilor virale sau prionice. Metodele de testare utilizate au fost: monitorizarea dinamicii creşterii bacteriene prin observare directă; tehnici de microscopie pentru caracteristicile morfologice şi tinctoriale ale bacteriilor din cultură; reacţia de floculare (Ramon) pentru evaluarea cantităţii de toxină tetanică produsă în cursul dezvoltării; spectroscopie de masă (MALDI Autoflex Bruker); secvenţierea genei ARNr 16S pentru evidenţierea identităţii şi a înrudirii genetice (SeqStudio Genetic Analyzer Applied Biosystems, BioEdit, http://rdp.cme.msu.edu/seqmatch/) şi secvenţierea întregului genom prin metode de secvenţiere de nouă generaţie pe platforma Ion Torrent PGM (Thermo Scientific). Rezultate şi discuţii. In prima fază a studiului au fost extrase din arhivă un număr de şaizeci de tuburi, reprezentând pasaje din ani diferiţi. După desigilare, au fost alimentate cu mediu de cultură şi menţinute în anaerostat la temperatura de 37°C pentru maxim 7 zile. In acest fel au fost revitalizate până în prezent treisprezece clone. Pentru fiecare a fost analizat modul de creştere pe diferite medii de cultură, precum şi gradul de puritate prin realizarea de frotiuri colorate Gram. Mediile utilizate au asigurat creşterea clostridiilor, dar nu au stimulat nici sporogeneza, nici producţia de toxină în condiţiile date. In următoarea fază au fost selectate zece clone, care au fost multiplicate, repartizate în criotuburi şi menţinute la congelatorul de 20-°C. Clona „22" a fost analizată prin metoda spectroscopiei de masă (Bruker MALDI Biotyper), confirmându-se identitatea de specie şi înrudirea cu tulpina de colecţie Clostridium tetani „DSM 11744 VML". Ulterior, rezultatul a fost confirmat prin secvenţierea genei ARNr 16S, obţinându-se