PREPARAREA ȘI STANDARDIZAREA UNUI ANTIGEN SOMATIC DE SALMONELLA ENTERITIDIS

• Published in: Romanian archives of microbiology and immunology 2022-11, Vol.81, p.85-86
• Main Authors: Mioara, Rădută Maria, Simona, Ciontea Adriana, Filip, Vladimirescu Alexandru, Daniela, Cristea, Romaniţa, Usein Codruţa, Bianca, Palade, Elisabeta, Marinescu Diana
• Format: Article
• Language: eng ; rum
• Subjects: Agglutination; Antibodies; Antigen processing; Antigens; Antisera; Centrifugation; Citrobacter freundii; E coli; Escherichia coli; Gentian violet; Salmonella; Salmonella enterica; Salmonella Typhimurium; Standardization
• ISSN: 1222-3891; 2601-9418

Obiective. Studiul de faţă a urmărit realizarea protocolului de preparare şi standardizare a unui antigen somatic pentru detecţia anticorpilor seroaglutinanţi la persoanele infectate cu Salmonella enterica serovar Enteritidis (SE). Materiale şi metode. Tulpinile de Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis ATCC-13076 (SE) şi serovar Typhimurium ATCC-14028 (ST), Escherichia coli ATCC-25922 şi Citrobacter freundii au fost însămânţate pe agar nutritiv şi incubate aerob pentru 16-24 ore la 37°C. Pentru obţinerea antigenelor somatice au fost aplicate două metode de recoltare şi prelucrare a culturilor bacteriene: cu alcool etilic absolut P.A. 95,5% şi incubare 16 ore la 25°C, respectiv cu ser fiziologic steril (SFS) şi incubare în baie de apă, 60 minute la 100°C. Ulterior, antigenele somatice au fost purificate prin centrifugare repetată cu SFS. Jumătate din volumul antigenelor somatice obţinute au fost colorate cu cristal violet. Standardizarea antigenelor somatice, diluate în SFS la concentraţii de 1-8 Unităţi McFarland (DEN-1B, Biosan) a fost efectuată prin determinarea sensibilităţii (Se) şi specificităţii (Sp), folosind metoda aglutinării. Reacţiile de aglutinare rapidă pe lamă (RAR) cu antiseruri Salmonella polivalente (OMA, OMB) şi monovalente (O:4,5 şi O:9) BIO-RAD au fost citite şi interpretate în interval de 60 de secunde. Experimentele au fost efectuate în triplicat. Rezultate şi discuţii. Antigenul somatic SE a aglutinat cu antiserurile Salmonella OMA şi O:9 (Se), dar nu a aglutinat cu O:4 (Sp). Antigenul somatic ST a aglutinat cu antiserurile OMA şi O:4,5 (Se) şi nu a aglutinat cu O:9 (Sp). RAR cu antigenul colorat a fost foarte uşor observantă cu ochiul liber, comparativ cu cel necolorat, vizualizată la lupă în lumină oblică. Nu au fost constatate reacţii de aglutinare cross-reactive, comparativ cu studiile efectuate anterior pe antigene corpusculare. Concluzii. Antigenul somatic SE a îndeplinit criteriile de sensibilitate, specificitate şi repetabilitate. Colorarea antigenului a uşurat semnificativ citirea cu ochiul liber şi interpretarea RAR. Sursa de finanţare: Proiect intern (PI) finanţat în 2021.